Lorsqu'un peptide de recherche est d\u00e9crit comme \u201c v\u00e9rifi\u00e9 par HPLC \u201d ou \u201c test\u00e9 par HPLC + MS \u201d, cela signifie que deux techniques d'analyse compl\u00e9mentaires sont mises en \u0153uvre. Elles sont souvent mentionn\u00e9es conjointement, mais elles mesurent des param\u00e8tres diff\u00e9rents. Conna\u00eetre cette distinction facilite l'interpr\u00e9tation de tout certificat d'analyse.<\/p>\n
La chromatographie liquide haute performance consiste \u00e0 faire passer un \u00e9chantillon dissous \u00e0 travers une colonne garnie sous haute pression. Les diff\u00e9rentes mol\u00e9cules traversent la colonne \u00e0 des vitesses diff\u00e9rentes en fonction de l'intensit\u00e9 de leur interaction avec le mat\u00e9riau de la colonne, ce qui permet de s\u00e9parer le peptide principal des impuret\u00e9s associ\u00e9es. Un d\u00e9tecteur enregistre chaque composant sous forme de pic. En int\u00e9grant l'aire sous le pic principal par rapport \u00e0 l'aire totale, l'analyste calcule le pourcentage de puret\u00e9.<\/p>\n
La HPLC est donc une puret\u00e9<\/strong> outil. Il permet de d\u00e9terminer la proportion du compos\u00e9 dominant par rapport au reste de l'\u00e9chantillon, mais \u00e0 lui seul, il ne permet pas d'identifier ce qu'est r\u00e9ellement ce compos\u00e9 dominant.<\/p>\n La spectrom\u00e9trie de masse (MS) ionise les mol\u00e9cules et mesure leur rapport masse\/charge avec une grande pr\u00e9cision. Pour un peptide, la masse mesur\u00e9e est compar\u00e9e \u00e0 la masse th\u00e9orique d\u00e9riv\u00e9e de sa s\u00e9quence d'acides amin\u00e9s. Une correspondance \u00e9troite confirme identit\u00e9<\/strong>: la mol\u00e9cule correspond bien \u00e0 la s\u00e9quence indiqu\u00e9e sur l'\u00e9tiquette, et non \u00e0 un autre peptide de taille similaire.<\/p>\n La spectrom\u00e9trie de masse (MS) est un outil d'identification. Elle est particuli\u00e8rement efficace pour confirmer qu'il s'agit bien de la \u201c bonne mol\u00e9cule \u201d, mais elle ne constitue pas la principale m\u00e9thode de quantification de la puret\u00e9.<\/p>\n Examinons les lacunes que pr\u00e9sente chaque technique :<\/p>\n Utilis\u00e9es conjointement, la HPLC permet de d\u00e9terminer le \u201c degr\u00e9 de puret\u00e9 \u201d et la MS de v\u00e9rifier s\u2019il s\u2019agit bien de la \u201c bonne mol\u00e9cule \u201d. Un certificat d\u2019analyse (COA) combinant ces deux techniques offre une vision bien plus compl\u00e8te que chacune d\u2019entre elles prise isol\u00e9ment, ce qui explique pourquoi la combinaison \u201c HPLC + MS \u201d est devenue la norme pratique en mati\u00e8re de caract\u00e9risation des peptides destin\u00e9s \u00e0 la recherche.<\/p>\n Dans un rapport combin\u00e9, vous devriez voir un chromatogramme HPLC (id\u00e9alement un pic dominant net accompagn\u00e9 d'un pourcentage de puret\u00e9 indiqu\u00e9) ainsi qu'un spectre ou un tableau de spectrom\u00e9trie de masse (MS) pr\u00e9sentant la masse observ\u00e9e \u00e0 c\u00f4t\u00e9 de la masse calcul\u00e9e. V\u00e9rifiez que la masse observ\u00e9e correspond au poids mol\u00e9culaire indiqu\u00e9 dans la fiche technique du produit et que le taux de puret\u00e9 correspond \u00e0 la qualit\u00e9 que vous avez command\u00e9e.<\/p>\n Une fois que vous aurez bien fait la distinction entre ces deux techniques, le certificat d'analyse (COA) d'un peptide de recherche cessera d'\u00eatre un enchev\u00eatrement de chiffres pour devenir un moyen de v\u00e9rification rapide et fiable.<\/p>\n Les compos\u00e9s mentionn\u00e9s sont des mat\u00e9riaux de r\u00e9f\u00e9rence de qualit\u00e9 recherche destin\u00e9s exclusivement \u00e0 un usage en laboratoire ; ils ne sont pas destin\u00e9s \u00e0 la consommation humaine ou animale.<\/em><\/p>","protected":false},"excerpt":{"rendered":" La HPLC et la spectrom\u00e9trie de masse permettent de r\u00e9pondre \u00e0 deux questions diff\u00e9rentes concernant un peptide. Comprendre ce que chacune de ces techniques mesure facilite la lecture de tout certificat d'analyse.<\/p>","protected":false},"author":1,"featured_media":111,"comment_status":"open","ping_status":"open","sticky":false,"template":"","format":"standard","meta":{"footnotes":""},"categories":[6],"tags":[],"class_list":["post-25","post","type-post","status-publish","format-standard","has-post-thumbnail","hentry","category-quality-testing"],"yoast_head":"\nCe que mesure la spectrom\u00e9trie de masse : l'identit\u00e9<\/h2>\n
Pourquoi les deux sont-ils utilis\u00e9s ensemble ?<\/h2>\n
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Comparer les deux r\u00e9sultats c\u00f4te \u00e0 c\u00f4te<\/h2>\n
Points \u00e0 retenir<\/h2>\n
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